Maria Prunai Falciani ha svolto una lunga carriera nelle biblioteche fiorentine. In servizio dal 1971 alla Biblioteca Riccardiana, che ha diretto fino al 1995, dal 1996 è stata assegnata alla Marucelliana. Li è rimasta fino al 2009, quando è stata chiamata alla Biblioteca Medicea Laurenziana che ha diretto per due anni. Dal 2008 al 2010 ha presieduto l’Ente Nazionale Giovanni Boccaccio.
A lei si devono alcuni studi sui manoscritti Riccardiani e Moreniani, il volume sulla storia della Biblioteca Marucelliana e soprattutto una intensa opera di valorizzazione del patrimonio bibliografico fra Otto e Novecento che ha promosso con mostre e manifestazioni. Ha curato per Polistampa La sboba (2021), diario di prigionia del padre Giulio Prunai che fu prigioniero nei lager nazisti dal 1943 al 1945.